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            液相色譜儀測定葛根素含量

             更新時間:2017-03-14 點擊量:3591

            葛根為豆科植物野葛 Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根,是常用中藥材,具有解肌退熱,生津,透疹,升陽止瀉功效,用于外感發(fā)熱頭痛、項背強痛,口渴,消渴,麻疹不透,熱痢,泄瀉,高血壓頸項強痛等[1]?,F(xiàn)代研究證實,葛根中的主要有效成分為葛根素等異黃酮類化合物,具有抗炎解熱、擴張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量的作用,同時也有降低血壓的作用。有關(guān)葛根中葛根素等異黃酮的含量測定研究已有不少報道[2-5],但對葛粉中葛根素含量測定報道不多。本文對葛粉中葛根素的提取條件和測試條件等進行比較研究,并采用液相色譜法對葛粉樣品進行了定量分析, 結(jié)果令人滿意。

             

                1 實驗部分

             

                1.1 儀器與試劑

             

                LC-10tvp液相色譜儀;SPD-10T紫外檢測器;N2010色譜工作站,島津UV-265紫外分光光度儀,多功能榨汁機/攪拌機SG300-I。甲醇(色譜純),水(二次蒸餾),其余均為分析純。葛根素對照品(中國藥品生物制品檢定所);鮮葛。

             

                1.2 色譜條件

             

               用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;色譜柱Vertex C18 (150×4.6mm I.D),MeOH-H2O-HAc(30:70:0.5)為流動相,紫外檢測波長250nm。

             

                2 結(jié)果與討論

             

                2.1 提取溶劑濃度的選擇

             

               精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml,超聲提取60分鐘,進樣5ul,比較峰面積,實驗結(jié)果表明30%乙醇提取。

             

                2.2 超聲提取時間的選擇

             

               精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇10ml,超聲提取30分鐘、45分鐘、60分鐘,進樣5ul,比較峰面積,實驗結(jié)果表明超聲60分鐘為*提取條件。

             

                2.3 流動相及流速的選擇

             

                試驗時曾采用下述流動相進行測定:甲醇-水(25:75)、甲醇-水-醋酸(30:70:0.5)、甲醇-水(30:70)為流動相,結(jié)果采用甲醇-水-冰醋酸(30:70:0.5)為流動相,樣品分離好。而流速也以1.0ml/min為合適。

             

                2.4 標(biāo)樣溶液的制備

             

               稱取一定量葛根素對照品,用30%乙醇溶解配制成濃度為13ug/ml的葛根素標(biāo)準(zhǔn)液。

             

                2.5 葛粉制備

             

               取鮮葛用水洗凈切片,稱取20g放入攪拌機內(nèi),攪拌三次,每次1分鐘,每次加水200ml, 150ml,100ml,合并漿汁放置二天,去掉上面的水,下面的粉漿用定量濾紙過濾,低溫干燥,放入干燥器中備用。

             

                2.6 供試品溶液制備

             

               稱取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超聲提取1h,濾紙過濾,濾液過0.45um濾膜作為供試品溶液。

             

                2.7 線性關(guān)系考察

             

                在上述色譜條件下,分別進標(biāo)樣溶液0.5、3、5、7、10μl,測得各峰面積。以葛根素為橫座標(biāo)(A),以峰面積(Y)為縱座標(biāo),計算得回歸方程:Y=3.90×106x+728.14,相關(guān)系數(shù)r=0.9999;結(jié)果紫外檢測葛根素在0.0065-0.13μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

             

                2.8 精密度試驗

             

               取上述標(biāo)樣溶液,連續(xù)進樣5次,測定,RSD為1.11%。

             

                2.9 重復(fù)性試驗

             

               取同一樣品重復(fù)測定5次,RSD為1.61%。

             

                2.10 穩(wěn)定性試驗

             

               取上述供試品溶液,0、2、5、7、10h進樣,RSD為2.1%,10小時內(nèi)進樣穩(wěn)定。

             

                2.11 回收率試驗

             

                取已知含量的樣品,分別加入葛根素標(biāo)樣,按上述方法測定5次,平均回收率為98.6%, RSD為1.76%。見表1。

             

                2.12 樣品分析

             

               精密吸取標(biāo)樣溶液5μl與供試品溶液5μl,注入液相色譜儀,測定,結(jié)果:葛粉中葛根素的含量為0.06%(n=3),見下圖。

             

                3 討論

             

               本文采用液相色譜法測定葛粉中葛根素的含量,方法簡單、快速、準(zhǔn)確,結(jié)果滿意,可用于葛粉中葛根素的含量測定。

             

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